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    上海千实:PCR仪的技术特性

  •   PCR仪即基因扩增仪,实际就是一个温控设备,能在95℃,55℃,72℃之间很好地进行温度控制。主要由外壳、变温反应腔、散热系统、加热系统、制冷系统、电子控制系统、供电系统、人机界面等各部分组成。
      PCR仪的原理:
      利用升温使DNA变性,用限制性内切酶使DNA双链解链,在聚合酶的作用下使单链复制成双链,进而达到基因复制的目的。
      PCR仪的技术特性:
      1、加热模式:立体膜加热技术;
      2、制冷技术:新一代“peltier”效应“半导体热泵制冷”;
      3、控温及管理:16位微机智能式;
      4、单机操作,也可与电脑联机使用,通过数据线可直观显示温度变化曲线;
      5、温度范围广,除基本功能外还具备停电保护,长时间高低温处理,低温培养,循环套循环等各种增强功能,可用于各种条件要求的PCR实验。
      PCR的分类:
      根据DNA扩增的目的和检测的标准可以将PCR仪分为:普通PCR仪,梯度PCR仪,原位PCR,实时荧光定量PCR仪等几类。
      1、普通PCR仪
      一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪,称之为普通PCR仪,也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。普通PCR仪主要应用于科研、教学、临床医学、检验、检疫等。
      2、梯度PCR仪
      一次性PCR扩增可设置一系列不同的退火温度条件的称之为梯度PCR仪。不同的DNA片段其适合的退火温度不同,通过设置一系列的梯度退火温度进行扩增,从而一次性PCR扩增就可以筛选出表达量高的适合退火温度进行有效的扩增。
      梯度PCR仪主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,这样既节约时间,也节约成本。在不设置梯度的情况下亦可当做普通的PCR用,多应用于科研、教学机构,检验、检疫等。
      3、原位PCR仪
      原位PCR是保持细胞或组织的完整性,使PCR反应体系渗透到组织和细胞中,在细胞的靶DNA所在的位置上进行基因扩增。不但可以检测到靶DNA,而且还可以了解靶DNA存在于何种细胞中,更有利于探讨靶DNA与细胞之间的关系。
      原位PCR仪主要应用于:检测外源性基因片段,提高检出率,集中在病毒感染的检查上;观察病原体在体内分布规律、内源性基因片段;检测导入基因;遗传病基因检测。
      4、实时荧光定量PCR仪
      在普通PCR仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,形成了具有荧光定量功能的PCR仪器。在PCR扩增时加入的引物是利用同位素、荧光素等进行标记,使用引物和荧光探针同时与模板特异性结合扩增。扩增的结果通过荧光信号采集系统实时采集信号连接输送到计算机分析处理系统,得出量化的实时结果输出。
      荧光定量PCR仪有单通道,双通道和多通道之分。当只用一种荧光探针标记的时候,选用单通道;有多种荧光标记的时候使用多通道。多通道利于做多重PCR,实现一次检测多种目的基因的功能。
      荧光定量PCR仪主要应用于临床医学检测、生物医药研发、食品行业、科研院校等。荧光定量检测技术在临床诊断方面很多,主要集中在各种病原体引起疾病的临床诊断与优生优育相关的疾病以及肺结核等。